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層析柱裝填方法您知道嗎?

更新時間:2022-12-22      瀏覽次數:1382

層析柱裝填方法您知道嗎?


1. 填裝之前,檢查層析柱各接頭、部件不能有破損漏氣,并將層析柱清洗干凈,壁上不要有殘留小顆粒,會影響層析效果;

2. 確保填料、層析柱、所有的緩沖液以及樣品溫度一致,溫度不一致容易導致產生氣泡。

3. 所有過柱子的液體(包括水、平衡緩沖液、洗脫緩沖液、再生溶液)用0.45um濾膜抽濾,并進行超聲脫氣,注意填料不可超聲脫氣;

4. 將填料用純水清洗幾遍,洗掉保存液,并將上層的細小顆粒棄去;

5. 關閉層析柱出水口,玻璃棒引流往層析柱內倒入約1/4柱體積的水(或緩沖液),務必使底端無氣泡;

6. 將填料用玻璃棒攪勻成懸漿,用玻璃棒引流,均勻的一次性倒入柱子內,注意務必不要產生氣泡,待柱子內填料穩(wěn)定,打開出液管,使凝膠在柱內自由沉降。

7. 如果是手動操作,將柱子用純水沖幾個柱體積,使柱床穩(wěn)定;

如果儀器操作,用逐漸加大流速的方法,將填料壓實,注意:既不能過松,也不能過緊,要注意不能超過填料的最大耐壓。

8. 上樣前,樣品要進行離心或者用0.45um濾膜過濾;

注意:

1. 始終保持柱內液面高于凝膠表面,否則水分蒸發(fā),凝膠變干,影響填料的純化效果,有轉換接頭的柱子,需要保證進出液管密封;

2. 防止液體流干,使柱內混入大量氣泡,影響純化效果;

3. 切莫超過填料的最大耐壓,以免對填料造成不可逆的損壞;

4. 注意不要超過層析柱的最大耐壓,超過最大耐壓可能會漏液,甚至沖掉柱頭;

5. 凝膠一般都比較昂貴,需小心操作,實驗后回收,盡量避免污染、浪費和損失。

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